山東譜析GC-17氣相色譜儀檢測野生菱角殼中多糖化合物方法
2020-03-01 16:14:11來源：admin
山東譜析科學(xué)儀器有限公司專業(yè)從事高端氣相色譜儀的研發(fā)、生產(chǎn)、銷售通。過優(yōu)化色譜分析方案，對從野生菱角殼中提取分離出多糖及對多糖的單糖組成進(jìn)行了深進(jìn)的氣相色譜分析，為進(jìn)一步開發(fā)和利用野生菱角資源提供了科學(xué)依據(jù)。
從20世紀(jì)60年代以來，人們逐漸發(fā)現(xiàn)多糖具有復(fù)雜多樣的生物活性和功能，如多糖有免疫調(diào)節(jié)功能可作為廣譜免疫促進(jìn)劑，如作為藥物可以治療風(fēng)濕病、慢性病毒性肝炎、癌癥等；還具有抗感染、抗放射、抗凝血、降血糖、降血脂，促進(jìn)核酸與蛋白質(zhì)的生物合成等作用。菱，別名菱角、水菱角、風(fēng)菱，為菱科菱屬植物烏菱TrapabicomisOsbeck的種子，在我們居住地附近微山湖區(qū)有大量的野生或種植。據(jù)文獻(xiàn)記載，其果殼、果柄、果、莖及葉柄均可進(jìn)藥，有健胃止痢、抗癌等作用；還可用于治療胃潰瘍、痢疾、食道癌、子宮頸癌及乳腺癌等。1、樣品、試劑與儀器
市售的菱角往仁后，殼曬干，粉碎備用。單糖及雙糖標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（半乳糖、阿拉伯糖、木糖、鼠李糖、甘露糖、葡萄糖、乳糖和蜜二糖）均購自ChemService，純度大于98％。所用化學(xué)試劑除甲醇和乙醇為色譜純外，其余均為分析純。GC--17氣相色譜儀（山東譜析儀器）。
2、實驗方法
（1）多糖化合物的提取及純化方法稱取800g洗凈曬干的菱角殼，加人1：1乙醇-乙醚混合液，65℃水浴回流1～3h往脂；殘渣中加水，9O～100℃水浴提取4～6h，更換凈水反復(fù)提取2～3次，合并深紅色多糖提取液，過濾，濃縮。向提取液加人3／7倍體積的乙醇，離心分離沉淀，凍干得多糖粗品F1。向上清液中加人1.0倍體積的乙醇，離心分離沉淀，凍干得多糖粗品F2。依此方法，向上清液中先后加人1.5和4.0倍體積乙醇，分別得到多糖粗品F3和F4。。若直接向原多糖提取液中加人4倍體積的無水乙醇，則得到混合多糖粗品F5。用Sevag法除往多糖粗品中的蛋白質(zhì)，H2O2法除往色素，透析72h后，濃縮，凍干，即得多糖純品。
（2）多糖的水解取多糖樣品10mg于安瓶中加人3moL／L三氟乙酸2mL，密封后在120℃恒溫中水解6h，用氮氣吹干三氟乙酸，加甲醇并吹干，水解產(chǎn)物加進(jìn)0.6mL0.05mol／LNaOH溶液，再加5mgNaBH4，室溫下反應(yīng)8—10h，加少許乙酸分解過量的NaBH4，至無氣泡產(chǎn)生為止。蒸干反應(yīng)液，以酸性甲醇洗滌反應(yīng)產(chǎn)物，蒸干甲醇液，重復(fù)3—4次以除往硼酸根，最后加進(jìn)甲醇蒸干并于烘箱中105℃除凈水分。
（3）乙?；苌ㄈ∷獾玫膯翁?mg，加進(jìn)0.5mL吡啶，1mL乙酸酐，加熱2h，冷卻后加甲苯2mL，用N2吹干，加進(jìn)氯仿，蒸餾水洗滌，用N2吹干得到棕黃色產(chǎn)物。此乙酰化的單糖醇用CHC13稀釋后進(jìn)行氣相色譜儀分析。
（4）三甲基硅烷化衍生法取水解得的單糖樣品6mg，加吡啶0.6mL，六甲基四硅胺烷0.2mL，三甲基氯硅烷0.2mL，振蕩，靜置，取上清液進(jìn)行氣相色譜儀析。
3、氣相色譜儀分析條件
HP-5石英毛細(xì)管色譜柱（美國安捷倫公司），（50m×0.22mm×0.25μm）；進(jìn)樣口溫度260℃，接口溫度270℃，載氣氦氣流速1.2mL／min，分流比20：1， 程序升溫：100℃→1O℃／min150℃→15℃/min260℃（40min）。
